Charakterisierung eines CaCl2‐abhängigen Transfektionssystems vonEscherichia coliund Lambda‐Phagen‐DNS
作者:
H. Andree,
D. H. Liebscher,
期刊:
Zeitschrift für allgemeine Mikrobiologie
(WILEY Available online 1978)
卷期:
Volume 18,
issue 1
页码: 1-16
ISSN:0044-2208
年代: 1978
DOI:10.1002/jobm.19780180102
出版商: Akademie‐Verlag
数据来源: WILEY
摘要:
AbstractDieE. coliK12‐Stämme C 600 und Y mel wurden nach CaCl2‐Behandlung mit Lambda‐Phagen‐DNS transfiziert. Untersucht wurde die Abhängigkeit der Transfektionseffektivität von der CaCl2‐Konzentration, der Wachstumpsphase und der Aufbewahrung der Rezipienten bei 0‐4 °C. Für beide Rezipienten wurde eine optimale CaCl2‐Konzentration von 0,2 m ermittelt. Beide Stämme zeigten einen Anstieg der Transfektionseffektivitäten bzw. eine gleichhohe Kompetenz bis 15‐30 Std. nach Präparation der Rezipienten. Während die Y mel‐Bakterien aus der frühen logarithmischen Wachstumsphase (2 × 108Bakterien/ml) die höchste Kompetenz aufwiesen, erhielten wir maximale Transfektionseffektivitäten mit C 600‐Rezipienten aus der mittleren bis späten log‐Phase.Das Transfektionssystem besitzt ein breites pH‐Optimum zwischen 5,0–6,0. Natrium‐Acetat‐Puffer (20 mm) erwies sich am geeignetsten.Eine zu starke Erhöhung der NaCl‐Konzentration im Transfektionsansatz führt zur Hemmung der DNS‐Aufnahme.Die Transfizierbarkeit der untersuchten Stämme ist unter jeweils optimalen Bedingungen gleich gut, reproduzierbar und liegt zwischen 1‐2 ×
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