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Charakterisierung eines CaCl2‐abhängigen Transfektionssystems vonEscherichia coliund Lambda‐Phagen‐DNS

 

作者: H. Andree,   D. H. Liebscher,  

 

期刊: Zeitschrift für allgemeine Mikrobiologie  (WILEY Available online 1978)
卷期: Volume 18, issue 1  

页码: 1-16

 

ISSN:0044-2208

 

年代: 1978

 

DOI:10.1002/jobm.19780180102

 

出版商: Akademie‐Verlag

 

数据来源: WILEY

 

摘要:

AbstractDieE. coliK12‐Stämme C 600 und Y mel wurden nach CaCl2‐Behandlung mit Lambda‐Phagen‐DNS transfiziert. Untersucht wurde die Abhängigkeit der Transfektionseffektivität von der CaCl2‐Konzentration, der Wachstumpsphase und der Aufbewahrung der Rezipienten bei 0‐4 °C. Für beide Rezipienten wurde eine optimale CaCl2‐Konzentration von 0,2 m ermittelt. Beide Stämme zeigten einen Anstieg der Transfektionseffektivitäten bzw. eine gleichhohe Kompetenz bis 15‐30 Std. nach Präparation der Rezipienten. Während die Y mel‐Bakterien aus der frühen logarithmischen Wachstumsphase (2 × 108Bakterien/ml) die höchste Kompetenz aufwiesen, erhielten wir maximale Transfektionseffektivitäten mit C 600‐Rezipienten aus der mittleren bis späten log‐Phase.Das Transfektionssystem besitzt ein breites pH‐Optimum zwischen 5,0–6,0. Natrium‐Acetat‐Puffer (20 mm) erwies sich am geeignetsten.Eine zu starke Erhöhung der NaCl‐Konzentration im Transfektionsansatz führt zur Hemmung der DNS‐Aufnahme.Die Transfizierbarkeit der untersuchten Stämme ist unter jeweils optimalen Bedingungen gleich gut, reproduzierbar und liegt zwischen 1‐2 ×

 

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