摘要:

Summary: An antiserum to the purified porcine outer acrosomal membrane (OAM) was raised in female Balb/c mice and was characterized by means of an indirect ELISA. The hyperimmune serum reacted selectively with the acrosomal cap of the sperm head and showed an extremely good cross reactivity with bull and human spermatozoa when assayed by indirect immunofluorescence. Immunoelectron microscopy using the protein A‐gold method further confirmed the specificity of the anti‐OAM‐antiserum for the OAM. In an effort to identify the OAM antigens recognized by the hyperimmune serum and to analyse the extent of cross reactivity on a molecular level, the SDS‐extractable proteins were separated by SDS‐PAGE, transblotted and immunoprinted using an12SJ‐con‐jugated anti‐mouse‐antibody. To facilitate functional and structural analysis of distinct OAM‐proteins monoclonal antibodies were generated by hybridization of mouse myeloma cells with the splenocytes of female Balb/c mice immunized with the purified OAM. One fusion resulted in about 100 anti‐OAM‐antibodies secreting hybridoma cultures, of which about 30% showed cross reaction with human and bull spermatozoa. Four stable cell lines were selected for this study secreting antibodies directed against the outer acrosomal membrane of boar spermatozoa. Whereas the polyclonal immune mouse serum stained the entire acrosomal cap, the four hybridoma antibodies generated a patch‐work‐like immunofluorescence pattern over the acrosome. HPLC‐ELISA of the solubilized OAM revealed first information on the nature of the corresponding membrane antigen.Zusammenfassung: Gegen die gereinigte äußere akrosomale Membran (OAM) aus Eber‐spermatozoen wurde bei weiblichen Balb/c‐Mäusen ein Antiserum gewonnen und mittels indirekten ELISA charakterisiert. Das Anti‐OAM‐Serum reagiert in der indirekten Immun‐fluoreszenz ausschließlich mit der akrosomalen Kappe des Spermatozoenkopfes und weist eine außerordentlich gute Kreuzreaktivität mit menschlichen Spermatozoen und Spermatozoen vom Bullen auf. Durch Immunelektronenmikroskopie wurde mittels der Protein‐A‐Gold (pAg)‐Methode die Spezifität des Antiserums gegen die OAM belegt. Um das Ausmaß der Kreuzreaktivität auf molekularer Ebene feststellen zu können, wurden die SDS‐extrahierbaren Spermatozoenproteine vom Eber, Bullen und Menschen im Westernblot auf ihre Immunreaktivität mit dem Antiserum untersucht.Um die funktionelle und strukturelle Analyse einzelner OAM‐Proteine zu erleichtern, wurden monoklonale Antikörper gegen die OAM durch Hybridisierung von Mausmyelom‐zellen mit den Milzzellen immunisierter Mäuse gewonnen. Eine Fusion führt zu etwa 100 Anti‐OAM Antikörper produzierenden Hybridomkulturen, von denen etwa 30% Kreuzreaktivität mit menschlichen Spermatozoen und Bullenspermatozoen zeigen. Von den etwa 20 stabilen Zell‐Linien, die Anti‐OAM IgG sezernieren, wurden vier für weitere Untersu‐chungen ausgewählt und die monoklonalen Antikörper mittels ELISA und indirekter Im‐munfluoreszenz charakterisiert. Im Gegensatz zu dem polyklonalen Mausserum gegen die OAM zeigen die monoklonalen Antikörper L81, L234, L264 in der indirekten Immun‐fluoreszenz ein granuläres Fluoreszenzmuster an der akrosomalen Kappe. L234 kreuzrea‐giert mit menschlichen Spermatozoen. Hochauflösende Gelfiltration in der

ISSN:0303-4569    

DOI:10.1111/j.1439-0272.1986.tb01769.x

出版商:Blackwell Publishing Ltd    

年代:1986

数据来源: WILEY

ISSN:0303-4569    

DOI:10.1111/j.1439-0272.1986.tb01770.x

出版商:Blackwell Publishing Ltd    

年代:1986

数据来源: WILEY

摘要:

Summary: The techniques of SDS‐polyacrylamide slab gel electrophoresis and a sensitive fluorescamine‐based method were used to study autoproteolysis of human seminal coagulum at various pH. The major protein bands of 72 and 55 Kd were optimally degraded at pH 7.5. Degradation at pH 3.5 was preceded by a lag period of 30 min. When the seminal coagulum was incubated for 5 min at pH 7.5 and then adjusted to pH 3.5, degradation was more rapid and complete than at pH 3.5 only. Autoproteolytic degradation product of discreted sizes were obtained when compared with degradation in the presence of pronase.Zusammenfassung: Die Techniken der SDS‐Polyacrylamid Gelplatten‐Elektrophorese und einer empfindlichen auf Fluorescamin basierenden Methode wurden benutzt, um Au‐toproteolyse von menschlichen Sperma‐Koagula bei verschiedenen pH‐Werten zu untersu‐chen. Die Haupt‐Protein‐Banden bei 72 und 55 Kilodalton wurden optimal abgebaut bei einem pH von 7,5. Bei pH 3,5 dauerte der Abbau 30 Minuten. Wenn Samen‐Koagulum für 5 Minuten bei pH 7,5 inkubiert und dann auf einen pH von 3,5 eingestellt wurde, war der Niederschlag schneller und vollständiger als bei pH 3,5 allein. Autoproteolytische Abbau‐produkte von unterschiedlicher Größe erhielten wir im Vergleich bei Degrad

ISSN:0303-4569    

DOI:10.1111/j.1439-0272.1986.tb01771.x

出版商:Blackwell Publishing Ltd    

年代:1986

数据来源: WILEY

ISSN:0303-4569    

DOI:10.1111/j.1439-0272.1986.tb01772.x

出版商:Blackwell Publishing Ltd    

年代:1986

数据来源: WILEY

摘要:

Summary: Rat follicle stimulating hormone (rFSH) was analysed in extracts of rat anterior pituitary using a newly developed separation method of reversed‐phase high performance liquid chromatography (RP‐HPLC) and post‐column detection of immunoreac‐tivity (rFSH‐IR) by radioimmunoassay (RIA) or immunoprecipitation with a specific anti‐rFSH antibody. Good separation of rFSH was achieved on a Waters Radial‐Peak 8MBC18 cartridge with a linear (60 min) gradient from 10–60% acetonitrile at constant 0.1% trifluoroacetic acid concentration.The elution profiles of radioiodinated purified rFSH [(125I)rFSH] as well as extracts of adult male and female rat pituitaries contained two main immunoreactive components (peaks 1 and 2) which eluted at 16–17 min and 21 min respectively. In the (125I)rFSH elution profile, the peaks of immunobinding corresponded to two major peaks of radioactivity. The male pituitary showed greater binding to anti‐rFSH‐serum of peak 1 and 2 eluate compared to female pituitary. At day 20 after orchidectomy, the amount of immunoreactive rFSH (rFSH‐IR) increased in both peaks (by 30% in peak 1 and 180% in peak 2); however, the rFSH‐IR level in peak 2 appeared to be more variable compared with that in peak 1. Subcutaneous implantation of 5 mg or IS mg of dihydrotestosterone (DHT) at the time of orchidectomy prevented the post‐castration elevation of rFSH‐IR at 10 and 20 days after surgery. The precise nature and physiological significance of the two elution peaks are not clear at this time; however, only peak 2 showed immunoreac‐tivity with anti‐rLH‐α‐subunit antibody (AFP 87713681) and the elution time of peak 2 coincided with that of (125I) rLH‐α subunit (AFP‐7264 B). It appears that the rat pituitary contains at least two FSH components which immunoreact with anti‐rFSH antibody and which vary independently of each other under altered hormonal conditions. The RP‐HPLC method provides a very useful tool for investigating the FSH structure and its changes under various experimental conditions.Zusammenfassung: Ratten‐FSH (rFSH) wurde in Extrakten aus Rattenhypophysenvor‐derlappen mit einerneuentwickelten Trennungsmethode, der Rückkehrphasen‐HPLC (RP‐HPLC) und mit post‐column‐Messung der Immunreaktivität (rFSH‐IR) mittels Radioimmunoassay (RIA) oder Immunpräzipitation mittels eines spezifischen Anti‐rFSH‐Anti‐körper analysiert. Gute Trennung des rFSH wurde erreicht bei Waters Radial‐Pack 8MBC18 Säule mit linearem (60 min) Gradienten von 10–60% Acetonnitril bei konstanter 0,1% Trifluoressigsäure‐Konzentration.Die Elutionsprofile von radiojodiertem gereinigtem rFSH [(125J)rFSH] sowie von Ex‐trakten aus Hypophysen ausgewachsener männlicher und weiblicher Ratten enthielten zwei immunreaktive Hauptkomponenten (Peaks 1 und 2), welche jeweils nach 16/17 min bzw. nach 21 min eluiert wurden. Im (125J) rFSH‐Elutionsprofil korrespondierten die Peaks der Immunbindung mit den zwei Hauptpeaks der Radioaktivität. Die männliche Hypophyse zeigte eine größere Bindungskapazität für Anti‐rFSH‐Serum im Peak 1 und 2‐Eluat verglichen mit weiblichen Hypophysen. Am 20. Tag nach der Orchidektomie war die Menge des immunorekativen rFSH in beiden Peaks (um 30% im Peak 1 und 180% im Peak 2) erhöht; jedoch scheint der rFSH‐IR‐Wert im Peak 2 variabler zu sein verglichen mit dem in Peak 1. Subkutane Applikation von 5 bzw. 15 mg Dihydrotestosteron (DHT) zur Zeit der Orchidektomie verhinderte die postoperative Erhöhung des rFSH am 10. und 20. p.o. Tag. Die genaue Naturund die physiologjsche Signifikanz der beiden Elutionspeaks sind zur Zeit noch nicht geklärt, jedoch zeigte nur Peak 2 Immunreaktivität mit Anti‐rLH‐alpha‐Subunit‐Antikörper (AFP 87713681), und die Elutionszeit des Peak 2 stimmte mit der der (125J)' rLH‐alpha‐Subunit (AFP‐7264 B) überein. Es scheint, daß die Hypophyse der Ratte minde‐stens zwei FSH‐Komponenten enthält, welche mit Anti‐rFSH‐Antikörpern immunreagie‐ren und die unabhängig voneinander unter veränderten hormonellen Bedingungen vari‐ieren. Die RP‐HPL

ISSN:0303-4569    

DOI:10.1111/j.1439-0272.1986.tb01773.x

出版商:Blackwell Publishing Ltd    

年代:1986

数据来源: WILEY

摘要:

Summary: The number of mononucleate and multinucleate Leydig cells per unit area of the testis was determined in normal adult men using the peroxidase‐anti‐peroxidase method for testosterone detection. The results of this study indicate that the number of multinucleate Leydig cells increases markedly with age, whereas the total Leydig cell population decreases.Zusammenfassung: Bei 65 normalen, erwachsenen Männern im Alter von 25–89 Jah‐ren, die bei Unfällen umgekommen waren und bei denen die Hoden 6–10 Stunden nach Eintritt des Todes entnommen werden konnten, wurde die Anzahl der mononukleären und multinukleären Leydigzellen für einen einheitlichen Bezirk der Hoden mittels der Peroxydase‐Anti‐Peroxydase‐Methode für die Testosteron‐Ermittlung untersucht. Die Er‐gebnisse zeigen, daß die Anzahl der multinukleären Leydigzellen mit steigendem Lebens‐alter deutlich zunimmt, während die ge

ISSN:0303-4569    

DOI:10.1111/j.1439-0272.1986.tb01774.x

出版商:Blackwell Publishing Ltd    

年代:1986

数据来源: WILEY

摘要:

Summary: The presence of cells bearing solitary cilia has been studied in the testes of normal and neonatally estrogenized rats. Peritubular myoid cells and undifferentiated interstitial cells showed a higher frequency of cilia in estrogenized animals than in control ones, from 15 to 45 days of age, the differences being slighter at 90 days of age.Zusammenfassung: Das Vorhandensein von solitären Cilien‐Zellen wurde in den Hoden von normalen Ratten und solchen, die neonatal Östrogene erhielten, untersucht. Peritu‐buläre myoide Zellen und undifferenzierte interstitielle Zellen zeigten zu einem höheren Anteil Cilien bei den östrogenbehandelten Tieren als bei den Kontrolltieren, und zwar in einem Alter von 15 bis 45 Tagen. Bei einem Alter von 90 Tagen waren die Unterschi

ISSN:0303-4569    

DOI:10.1111/j.1439-0272.1986.tb01775.x

出版商:Blackwell Publishing Ltd    

年代:1986

数据来源: WILEY

摘要:

Book reviewed in this article:A.H. Murken:Lehrbuch der medizinischen Terminologie.R.O. Greep:Recent Progress in Hormone Research, Volume 41, 1985.

ISSN:0303-4569    

DOI:10.1111/j.1439-0272.1986.tb01776.x

出版商:Blackwell Publishing Ltd    

年代:1986

数据来源: WILEY

ISSN:0303-4569    

DOI:10.1111/j.1439-0272.1986.tb01777.x

出版商:Blackwell Publishing Ltd    

年代:1986

数据来源: WILEY

摘要:

Zusammenfassung: Nebenhodengewebe von 8 Patienten, die langfristig mit Östrogenen und Antiandrogenen behandelt worden sind, wild licht‐ und elektronenmikroskopisch un‐tersucht. Es zeigen sich erhebliche regressiv‐degenerative Veränderungen des Epithels mit Abnahme oder Fehlen der normalen Oberflächendifferenzierung, Verminderung der Zell‐organellen sowie Anhäufung von Phagolysosomen. Im Bereich der extraepithelialen Kanäl‐chenwand kommt es zu einer starken Hyperplasie des glatten Muskelgewebes.Summary: Epididymal tissue from 8 patients treated with estrogen and antiandrogen for a long time was studied by light‐ and electron microscopy. There are severe regressiv‐degenerative changes within the epithelium characterized by a decrease or loss of the normal surface differentiation, a decrease of cell organelles and an increase of phagolyso‐somes. Hyperplasia of the smooth muscle layer occurs in the extraepithelial part of

ISSN:0303-4569    

DOI:10.1111/j.1439-0272.1986.tb01778.x

出版商:Blackwell Publishing Ltd    

年代:1986

数据来源: WILEY