SummaryIn bull seminal plasma 5′‐nucleotidase is present in heterogeneous forms. The heterogeneity is abolished by treatment of bull seminal plasma with the detergent sodium cholate. The purified enzyme, which is a glycoprotein, shows an apparent molecular mass of 160 kDa on gel filtration in the presence of 50 mmol sodium cholate and an apparent molecular mass of 72 kDa upon SDS/polyacrylamide‐gel electrophoresis. The 5′‐nucleotidase of bull seminal plasma is a metalloprotein containing 2 zinc ions per molecule of dimeric protein. The removal of the two zinc ions from the protein results in a completely inactive apoenzyme. The substitution of the endogenous zinc with Co(II) or Cu(II) produces a holoenzyme which is slightly activated in the case of Co(II), whereas, in the case of Cu(II) only 65% of the initial activity is recovered. The enzyme has a covalently attached glycosyl‐phosphatidylinositol moiety which can be removed by treatment with phosphatidylinositol‐specific phospholipase C. ESR studies have indicated a radius of 35 Å for the protein and that Cu(II) binds to the metal‐free enzyme to a site in which sulphur donors can be excluded.ZusammenfassungIm Seminalplasma des Bullen kommt die 5′‐Nucleotidase in heterogener Form vor. Diese Heterogenität verschwindet, wenn das Seminalplasma mit dem Detergens Natriumcholat behandelt wird. Das gereinigte Enzym, ein Glykoprotein, zeigt nach Gelfiltration in Gegenwart von 50 mmol Natriumcholat ein apparentes Molekulargewicht von 160 kDa und von 72 kDa nach SDS‐Polyacrylamid‐Gelelektrophorese. Die 5′‐Nukleotidase des Bullenseminalplasmas ist ein Metalloprotein, das 2 Zinkionen pro Molekül des dimeren Proteins enthält. Die Entfernung der beiden Zinkionen von dem Protein führt zu einem vollständig inaktiven Apoenzym. Die Substitution von endogenem Zink durch Co(II) oder Cu(II) führt zu einem leicht aktivierten Holoenzym [bei Co(II)], wohingegen im Fall von Cu(II) nur 65% der Ausgangsaktivität gemessen wurden. Das Enzym enthält einen kovalent gebundenen Glycosyl‐Phosphatidylinositol‐Anteil, der mit Phosphatidylinositol‐spezifischer Phospholipase C entfernt werden kann. ESR‐Studien haben einen Radius von 35 Å für das Protein ergeben und gezeigt, daß Cu(II) an das metallfreie Enyzm an einer Stelle bindet, an de